Лабораторная диагностика впч

Система гибридной ловушки — Digene Hybrid Capture System II

Неамплификационные методы определения ДНК ВПЧ в настоящее время с диагностической целью не используются. Они в ходу в научно-исследовательских лабораториях.

Среди амплификационных методов наибольшее распространение получила ПЦР, благодаря которой были получены ценные сведения о типах ДНК. Однако постановка ПЦР имеет большое количество ограничений, чтобы не получить ложноположительных результатов. Ограничения в первую очередь касаются строгого разграничения и разобщения по отдельным помещениям разных этапов работы, строгого соблюдения правил пользования перчатками, халатами, лабораторным оборудованием в пределах помещения, предназначенного для определенного этапа исследования, иначе может случиться перенос какого-либо количества ДНК с последующим его намножением в ПЦР. Кроме того, в мире еще нет стандартных реактивов для всех типов ВПЧ, практически используются праймеры и другие реактивы собственного лабораторного изготовления.

Не останавливаясь подробно на мишень-амплификационных методах, обратимся к сигнальным амплификационным методам, которые не требуют тех ограничений в деятельности, которые характерны для ПЦР-лабораторий. Среди них привлекает внимание система двойной генной ловушки — Digene Hybrid Capture System II фирмы Abbott, которая обеспечивает:

— компьютерную интерпретацию результатов, что исключает субъективизм в оценке;

— воспроизводимость и достоверность результатов;

— полный цикл исследования в течение одного рабочего дня;

Система двойной генной ловушки — Digene Hybrid Capture System II использует РНК-ДНК гибридизацию в растворе с последующей хвостовой» иммунологической реакцией между гибридом РНК пробы — ДНК мишени и специфическими антителами к этому гибриду. Тест обязан своей высокой специфичностью нескольким независимым источникам.

Во-первых, весь геном вируса является мишенью. Длинная одноцепочечная РНК эффективно гибридизуется со всеми 8000 нуклеотидов ДНК ВПЧ. Гибрид ДНК-РНК более стабилен, что позволяет избежать нежелательных побочных реакций.

Во-вторых, источником дополнительной чувствительности в реакции является использование антител к гибриду РНК-ДНК, конъюгированных с множеством молекул щелочной фосфатазы. Эти меченные антитела распознают короткие цепочки РНК-ДНК гибрида способом, который не имеет отношения к последовательностям нуклеотидов ДНК и РНК. Тысячи молекул антител могут покрыть единичный геномный гибрид ДНК ВПЧ.

В-третьих, каждый иммобилизированный энзим щелочной фосфатазы реагирует с множеством молекул хемилюминесцента диоксетана за 1 минуту и вызывает постоянный поток фотонов, которые подсчитываются фотомультиплейерной трубкой люминометра.

В-четвертых, система генной ловушки имеет преимущества перед естественной амплификацией, т.к. вовлекает большой объем (10-20%) клинического материала в реакцию. Интенсивность испускаемого света пропорциональна количеству ДНК мишени и выражается как отношение сигнала к положительному контролю. На рис. 5 приводим схему опыта по выявлению ДНК ВПЧ по Lorincz А. и Davies P.

Рис. 5. Детекция ВПЧ с помощью HCS II (по Lorincz А. и Davies P.О)

В «гибридной системе ловушки» — HCS II используются РНК-пробы, комплементарные к полной геномной последовательности 13 канцерогенных типов ВПЧ и 5 типов ВПЧ низкого риска. Составляются смеси — «коктейли» высокого и низкого риска соответственно. Каждый «коктейль» раздельно инкубируется с денатурированной (одноцепочечной) ДНК из клинического образца. Образующийся РНК-ДНК гибрид переносится в лунки микропанели, на которых иммобилизованы моноклональные антитела к РНК-ДНК гибри ду. Антитела специфически распознают гибрид, который прикрепляется к лунке панели. Уловленные таким образом РНК-ДНК гибриды затем вступают в реакцию с моноклональными антителами к гибриду, меченными щелочной фосфатазой. Избыток антител и негибридизированных молекул удаляют промыванием. В лунки добавляют люминесцирующий субстрат диоксетан. Если субстрат присоединяется к меченному щелочной фосфатазой конъюгату, то происходит испускание света. Эмиссию света можно измерить с помощью люминометра. Количество света генерируется в пропорции к числу мишеней ДНК в образце. HCS II может определить и различить канцерогенные типы ВПЧ (16,18,31,33,39,45,51,52,56,58,59 и 68) и типы низкого риска (6,11,42,43 и 44). Аналитическая чувствительность системы – 0,2 пикаграмма/мл (1000 копий генома ВПЧ). Учитывая клиническую необходимость обследования женщин с низкой степенью клеточной атипии, прибор установлен на определение 5000 копий ДНК/мл, т.е. на определение 1.0 пикаграмма/мл.

Это интересно:  Генферон от впч отзывы

В комплексе с цитологическим исследованием, определение ВПЧ с использованием HCS II достигает 95% обнаружения ЦИН-1 и ЦИН-2, т.е. может служить эффективным дополнением к цервикальной цитологии и может помочь снизить заболеваемость и смертность от цервикального рака.

Диагностика ВПЧ

Существует множество типов ВПЧ, из которых на сегодня изучено более 130, и многие из них обладают высокой степенью онкогенного риска. Практически 95% случаев развития рака шейки матки у женщин связаны именно с вирусом папилломы человека.

Проникает папилломавирусная инфекция через микротравмы кожи или слизистой и проявляется на разных участках тела в форме папиллом, бородавок или кондилом. При половом способе передачи вируса кондиломы и папилломы локализуются в интимных местах женщины — на слизистой половых губ, промежности, во влагалище, в области ануса, мочеиспускательного канала.

Папилломавирусная инфекция в большинстве случаев протекает абсолютно бессимптомно и обнаруживается только с помощью таких специфических методом диагностики, как:

  • цитологическое исследование мазка на ВПЧ,
  • гистологическое исследование,
  • метод ПЦР,
  • определение суммарной вирусной нагрузки ВПЧ.

Вылечить папилломавирус раз и навсегда невозможно, по крайней мере, уровень развития современной медицины пока этого не позволяет. Но держать его под контролем вполне возможно. Существует множество методов лечения ВПЧ, направленных на устранение всех видимых проявлений инфекции и минимизации риска развития осложнений, включая онкологию.

ПЦР-диагностика ВПЧ

Для диагностики ВПЧ применяют специальные ВПЧ-тесты, и одним из самых точных является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Этот анализ дает возможность не только обнаружить папилломавирус, но и точно установить его тип. Основан такой метод исследования на избирательном многократном копировании определенного участка ДНК. Многие методы диагностики способны выявить белки-маркеры возбудителя, что позволяет говорить о наличии инфекции. Обнаружение участка ДНК вируса папилломы методом ПЦР прямо указывает на присутствие возбудителя.

За генетическую информацию любого живого организма отвечает ДНК, состоящая из последовательности четырех нуклеотидов — А (аденин), Т (тимин), Г (гуанин), Ц (цитозин). Главным правилом генетики является принцип комплиментарности, то есть нуклеотиды соединяются лишь в определенном порядке, а каждое живое создание, включая и ВПЧ, имеет собственный, уникальный набор ДНК.

Это интересно:  Анализ на ВПЧ: расшифровка результатов и таблица

Именно на обнаружение этого уникального набора генетической информации и направлен анализ ПЦР. Основным достоинством данного метода диагностики является его высокая чувствительность. ПЦР анализ способен обнаружить даже единичные клетки ВПЧ, что невозможно сделать никаким иным методом исследования.

Материалом для анализа ПЦР могут служить:

  • соскобы со слизистых влагалища, уретры, шейки матки;
  • кровь и ее компоненты;
  • любые биологические жидкости (отделяемое влагалища и т. д.).

Постановка реакции комплиментарности занимает всего несколько часов, что позволяет выявить возбудителя уже в день сдачи анализа, а не ожидать неделю, как при бактериологическом посеве. С помощью ПЦР определяется именно возбудитель, то есть непосредственно папилломавирус, а не реакция организма на его внедрение, что позволяет обнаружить инфекционного агента, даже если никаких клинических признаков его присутствия нет.

ВПЧ у женщин

Папилломавирус у женщин проявляется остроконечными и плоскими кондиломами, дисплазией и раком шейки матки. Однако в большинстве клинических случаев ВПЧ никак себя не проявляет и обнаруживается при комплексном обследовании женщины, обычно во время беременности или подготовки к ней.

Продолжительность инкубационного периода после заражения может составлять от пары недель до нескольких лет- все зависит от состояния иммунной системы женщины. Хотя многие проявления ВПЧ часто проходят сами (при условии хорошего иммунитета), для каждой женщины существует риск, что вирус даст толчок патологическим состояниям шейки матки, которые разовьются в инвазивный рак.

Причем на фоне ослабленного иммунитета для его развития достаточно всего 5-10 лет. Поэтому так важно регулярно проходить скрининговые исследования всем сексуально активным женщинам, даже при отсутствии симптомов заболевания.

Лечение ВПЧ

Тактика лечения ВПЧ подбирается индивидуально, с учетом иммунного статуса женщины, наличия сопутствующих патологий и урогенитальных инфекций и т. д. Комплексная терапия включает консервативное и оперативное лечение:

  • неспецифическая противовирусная терапия;
  • иммуностимуляторы;
  • витаминотерапия;
  • удаление папиллом, кондилом, генитальных бородавок.

Специалисты Клиники Современной Медицины обладают большим опытом в области диагностики типа и количественного показателя папилломавируса и его эффективного лечения. Схема терапевтических мероприятий для борьбы с ВПЧ подбирается после детального обследования пациентки и при установлении точного типа вируса и стадии заболевания.

Применение противовирусных препаратов нового поколения и передовых атравматичных оперативных техник позволяет гарантировать максимальный результат лечения и минимизировать возможный риск развития рецидива.

ВИРУС ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА И ПРОФИЛАКТИКА ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

Полный текст:

Резюме. В лекции представлены материалы, отражающие современное состояние знаний о вирусе папилломы человека (ВПЧ) и патогенезе папилломавирусной инфекции. Рассмотрены актуальные вопросы эпидемиологии, лабораторной диагностики и профилактики ВПЧ-ассоциированных поражений эпителия шейки матки.

Ключ. слова

д.м.н., профессор, зав. лабораторией молекулярной микробиологии

197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14

Список литературы

1. Дмитриев Г.А., Биткина О.А. Папилломавирусная инфекция. — М.: Медицинская книга, 2006. — 77 с.

2. Ершов В.А., Нарвская О.В. Фоновые процессы и неоплазия эпителия шейки матки. — СПб.: ООО «Человек», 2007. — 80 с.

3. Киселев В.И. Вирусы папилломы человека в развитии рака шейки матки. — М., 2004. — 179 с.

4. Краснопольский В.И., Логутова Л.С., Серова О.Ф., Бесова Н.В., Туманова В.А., 3apочeнцeвa Н.В., Баринова И.В. Возможности использования цитологического метода исследования шейки матки у беременных // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2009. — № 3. — С. 83–86.

Это интересно:  Как происходит заражение впч

5. Куевда Д.А., Шипулина О.Ю. Генодиагностика генитальной папилломавирусной инфекции: алгоритмы использования и требования к тестам // Папилломавирусная инфекция и злокачественные новообразования. интегрированная система надзора и профилактики: материалы междунар. симпозиума. — СПб.: НИИЭМ им. Пастера, 2009. — 120 с.

6. Кулаков В.И., Прилепская В.Н. Профилактика рака шейки матки: руководство для врачей. — М.: МЕДпресс-информ, 2008. — 56 с.

7. Лялина Л.В. Инфекции и рак: перспективы развития единой системы эпидемиологического надзора и профилактики // Папилломавирусная инфекция и злокачественные новообразования. Интегрированная система надзора и профилактики: материалы междунар. симпозиума. — СПб.: НИИЭМ им. Пастера, 2009. — С. 7–11.

8. Лялина Л.В., Носков Ф.С., Жебрун А.Б., Нарвская О.В., Мерабишвили В.М., Сафронникова Н.Р., Айламазян Э.К., Сельков С.А., Веденеева Г.Н., Струков Е.Л., Чухловин А.Б., Зарайский М.И., О.В. Нарвская Инфекция и иммунитет Исаков В.А., Ермоленко Д.К., Боровцова Т.М., Шлыгин С.А., Вяткина Г.П., Петрова Т.Ф., Булатова Н.В., Неваленная Г.И., Козикова И.А., Каткявичене Е.В., Архипов А.В., Мишкин В.И., Лыщев А.А., Касаткин Е.В., Завадская Т.Н. Организация и проведение скрининга на наличие онкогенных вирусов папилломы человека в целях профилактики злокачественных новообразований органов репродуктивной системы: Методические рекомендации. — СПб., 2005. — 28 с.

9. Хансон К.П., Имянитов Е.Н. Современные представления о канцерогенезе рака шейки матки // Практическая онкология. — 2002. — Т. 3, № 3. — С. 145–155.

10. Шипулина О.Ю. Встречаемость генотипов вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска при раке и предраковой патологии шейки матки // Папилломавирусная инфекция и злокачественные новообразования. Интегрированная система надзора и профилактики: материалы междунар. симпозиума. — СПб.: НИИЭМ им. Пастера, 2009. — С. 40–44.

11. Apgar B.S., Zoschnick L., Wright T.C. Jr. The 2001 Bethesda system terminology // Am. Fam. Physician. — 2003. — Vol. 68, N 15. — P. 1992–1998.

12. Doorbar J. The papillomavirus life cycle // J. Clin. Virol. — 2005. — Jg. 32 (Suppl. 1). — S. 7–15.

13. Mu oz N. Castellsagu X., Gonz les A., Gissmann L. HPV in the ethiology of human cancer // Vaccine. — 2006. — Vol. 24, uppl. 3. — S. 3–10.

14. Papanicolaou G.N. Atlas of exfoliative cytology. — Cambridge: Harvard Univ. Press, 1963. — 438 p.

Дополнительные файлы

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

Статья написана по материалам сайтов: studfiles.net, www.ksmed.ru, www.iimmun.ru.

»

Помогла статья? Оцените её
1 Star2 Stars3 Stars4 Stars5 Stars
Загрузка...
Добавить комментарий

Adblock detector